John Michael Turturro, 28 Şubat 1957'de New York City'nin Brooklyn semtinde doğdu. Annesi Katherine Florence Sicilya kökenli bir caz şarkıcısıydı ve babası Nicholas Turturro İtalya'dan ABD'ye göç etmiş bir marangoz ve inşaat işçisiydi. Altı yaşında ailesiyle birlikte Queens, New York'a taşındı. Turturro, New Paltz'teki State University of New York'ta tiyatro sanatları eğitimi aldı ve Yale School of Drama'da yüksek lisansını tamamladı. Turturro'nun sinemadaki boy göstermesi Martin Scorsese'nin Raging Bull (1980) filminde diyalogsuz bir figüran rolü ile geldi. 1983'te Eugene O'Neill Theatre Center'da John Patrick Shanley'nin Danny and the Deep Blue Sea adlı oyununda başrolü üstlendi ve ertesi yıl Off-Broadway'de bu rolü tekrar canlandırarak Obie Ödülü kazandı. 1987 yılında Five Corners filmindeki performansı, Spike Lee'nin dikkatini çekti ve bu işbirliği Do the Right Thing (1989) filmini doğurdu. Aralarında Mo' Better Blues (1990), Jungle Fever (1991), Clockers (1995), He Got Game (1998), Summer of Sam (1999), She Hate Me (2004) ve Miracle at St. Anna (2008) adlı yapımların da olduğu dokuz filmde Spike Lee ile birlikte çalıştı. Spike Lee’nin yanı sıra Coen Kardeşler ile uzun süreli bir işbirliği yapan John Turturro, Miller's Crossing (1990), Barton Fink (1991), The Big Lebowski (1998) ve O Brother, Where Art Thou? (2000) gibi filmlerde rol aldı. Ayrıca, Adam Sandler'ın Mr. Deeds (2002) ve You Don't Mess with the Zohan (2008) filmlerinde rol aldı. Turturro, Monk dizisinde Adrian Monk'un kardeşi Ambrose rolüyle Primetime Emmy Ödülü kazandı ve The Night Of (2016) mini dizisindeki performansıyla Emmy adaylığı aldı. 2022'de, DC Comics karakterine dayanan Matt Reeves'in The Batman filminde Carmine Falcone rolünü canlandırdı. 2023'te, The New Group tarafından sahnelenen Philip Roth'un Sabbath's Theater romanının Off-Broadway uyarlamasında, Mickey Sabbath rolünde yeniden tiyatro sahnesine çıktı. Ayrıca, Apple TV+'ın Severance (2022) dizisinde rol aldı ve bu performansıyla Primetime Emmy ve Altın Küre adaylıkları kazandı. Aktörlüğünün yanı sıra yönetmen olarak da kamera arkasına geçen John Turturro Mac (1992), Illuminata (1998), Romance and Cigarettes (2005), Fading Gigolo (2013) ve The Jesus Rolls (2020) gibi filmleri yönetmiştir.